重組人蛋白細胞因子的研究選擇-細胞因子

1．重組蛋白表達體系
 
       MCE 重組蛋白表達體系主要有：大腸桿菌，酵母細胞，昆蟲細胞和哺乳動物
細胞。
 
2．重組蛋白純度和濃度測定
 
重組蛋白純度測定方法：a. SDS-PAGE 測定法；b. HPLC 測定法；c. 銀染測
定法。
重組蛋白濃度測定方法：a. Bradford 蛋白定量測定法；b. BCA 蛋白定量測
定法；c. SDS-PAGE 蛋白定量測定法。
 
3．重組蛋白表達體系對比
      

 
 
4．重組蛋白表達體系選擇
 

 
5．重組蛋白開蓋使用前處理
 
為防止凍干粉產(chǎn)品的粉末沾在管壁或管蓋上，使用前請勿開蓋，離心(約
13000 rpm)處理 20-30 秒，使附于管蓋或管壁的蛋白收集于管底。MCE 保
證每管產(chǎn)品的蛋白總量達到標(biāo)示含量。
 
6．重組蛋白復(fù)溶
 
a. 使用前先離心(約 13000 rpm)處理 20-30 秒，使附于管蓋或管壁的蛋白
收集于管底。
b. 嚴(yán)格依據(jù)說明書，使用推薦的溶液將蛋白凍干粉溶解至推薦的濃度。大
多數(shù)重組蛋白建議溶解在滅菌超純水中，濃度不低于 100 μg/mL，以便于
后續(xù)進一步稀釋至工作濃度。
c. 用移液槍輕吹混勻，或?qū)⒐苌w蓋好后輕柔顛倒數(shù)次進行混勻，低速離心
數(shù)秒。
d. 復(fù)溶后的重組蛋白在室溫放置數(shù)分鐘，以保證蛋白能夠充分溶解。
 
7.重組蛋白儲存
 
由于每次凍融都會造成蛋白的部分變性，因此建議客戶收到產(chǎn)品后適量分
裝避免反復(fù)凍融。
a. 短期儲存：
凍干粉狀態(tài)產(chǎn)品在室溫下存放 3 周，不影響活性。
復(fù)溶后的產(chǎn)品在 4℃ 可穩(wěn)定儲存 1-2 周。
b. 長期儲存：
凍干粉狀態(tài)產(chǎn)品在 -20℃ 下，可穩(wěn)定保存至少一年；推薦 -80℃ 長期保存，
以獲得更穩(wěn)定性能的產(chǎn)品。
可選擇包含一定濃度載體蛋白(0.1% BSA， 5% HSA， 10% FBS，或 5% 海
藻糖)的溶液或培養(yǎng)基復(fù)溶產(chǎn)品，分裝后凍存于 -20℃ 下，可保存至少三個
月；推薦 -80℃ 長期保存，以獲得更穩(wěn)定性能的產(chǎn)品。
注：分裝凍存時，蛋白濃度不低于 100 ng/μL，且每管的體積不可小于 20
μL。
 
8.重組蛋白標(biāo)簽影響
 
蛋白標(biāo)簽指重組蛋白制備過程中與目的蛋白融合表達的蛋白或多肽。MCE
的重組蛋白產(chǎn)品大部分為無標(biāo)簽狀態(tài)，但少數(shù)重組蛋白產(chǎn)品因為不同目的
需要加有標(biāo)簽。
a. 標(biāo)簽利于蛋白純化。
b. 當(dāng)目的蛋白無特定抗體直接鑒定，可利用標(biāo)簽進行 Western Blot 或
ELISA 分析方法鑒定。
c. Fc 標(biāo)簽可以提升重組蛋白的半衰期以提高分子的穩(wěn)定性，同時也能夠促
進重組蛋白形成活性二聚體。
重組蛋白標(biāo)簽對蛋白的生物學(xué)活性影響存在未知結(jié)論，但對大部分檢測應(yīng)
用中，重組蛋白的標(biāo)簽對蛋白本身生物學(xué)活性并無影響，所以無需移除。
MCE 對重組蛋白產(chǎn)品都已經(jīng)做過生物學(xué)活性檢測并將數(shù)據(jù)公示于 COA 中。
 
9. 重組蛋白活力值與計算方法
 
MCE 重組蛋白的生物學(xué)活性 (ED50) 測定數(shù)據(jù)在 COA 中可以獲得。ED50 是
Effective Dose 50 的縮寫，是可誘導(dǎo) 50% 大反應(yīng)的蛋白濃度 (ng/mL)。
計算公式如下:

MCE 的重組蛋白產(chǎn)品并未采用 WHO (National Institute for Biological
Standards and Control) 設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)來測定活力值，以上計算公式并不適
用于“International Units”和“ED50”的轉(zhuǎn)換關(guān)系，需要采用標(biāo)準(zhǔn)品
對比相同實驗獲得該重組蛋白的 IU 值。
 
10. 重組蛋白 ED50 值的批間差
 
不同批次的產(chǎn)品或不同實驗方法的測定都會導(dǎo)致重組蛋白產(chǎn)品的 ED50 值變
化，我們推薦客戶根據(jù)自己的實驗測定得到合適的實際 ED50 值。
 
11. 重組蛋白應(yīng)用方案
 
MCE 重組蛋白產(chǎn)品的 COA 中顯示的實驗方案只是確認該產(chǎn)品的 ED50 值，
但并不與終端客戶的不同類型實驗結(jié)果存在等效性。如果客戶需要應(yīng)用在
不同于本公司產(chǎn)品測試的實驗方法時，我們建議客戶通過實際測試獲得
佳 ED50 值。
 
12.重組蛋白的種屬交叉活性
 
重組蛋白的種屬交叉活性需要根據(jù)具體產(chǎn)品而定；建議盡量選擇對應(yīng)種屬
的重組蛋白。如實在無法匹配種屬，以下信息供參考：
a. 大多數(shù)人細胞因子對小鼠細胞有效 (僅少數(shù)例外)。
b. 多數(shù)小鼠細胞因子對人細胞有效，但特異性可能不強。如小鼠的表皮生
長因子(EGF)對人的表皮細胞有活性，對人的其他種類細胞可能也有作用。
c. 干擾素、GM-CSF、IL-3、IL-4 具有種屬特異性，即重組人的這些細胞因
子只能作用于人細胞，對小鼠和大鼠等其他種而重組小鼠的這些細胞因子
也僅用于小鼠，對人的細胞無效。
d. 成纖維細胞生長因子 (FGFs)、神經(jīng)營養(yǎng)素 ( Neurotrophins，如 BDNGF、
GDNF、CNTF、β-NGF 等)、TGF-β 等高度保守，各種屬間交叉活性強。