貼壁細胞傳代及細胞凍存的方法

對于貼壁細胞傳代可參考以下方法：

1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2、力口 2m丨消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)于培養(yǎng)瓶中，置于37°C培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部 分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3、按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分 鐘，棄去上清液，補加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1: 2到1: 5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者 瓶中。

細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例：

1、細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入lml胰酶，細 胞變圓脫落后，加入2ml*培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2、1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至終濃度為 10%。加入DMSO后迅速混勻，按每lml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存 管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。

3、將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液 氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。